कोविड-19 में रियल टाइम आरटी-पीसीआर का आवेदन

क्या है रियल टाइम आरटी-पीसीआर?

पीसीआर रिएक्शन सिस्टम में फ्लोरोसेंट जीन जोड़ना, वास्तविक समय में पूरी पीसीआर प्रक्रिया की निगरानी करने के लिए फ्लोरेसेंस सिग्नल संचय का उपयोग करना, और फिर एक मानक वक्र के माध्यम से अज्ञात टेम्पलेट को मात्रात्मक रूप से वास्तविक समय फ्लोरेसेंस मात्रात्मक पीसीआर प्रौद्योगिकी कहा जाता है, जिसे वास्तविक समय क्यू-पीसीआर के रूप में भी जाना जाता है।

पीसीआर प्रवर्धन का सिद्धांत साधारण पीसीआर उपकरण के समान है, सिवाय इसके कि पीसीआर प्रवर्धन के दौरान जोड़े गए प्राइमर आइसोटोप, फ्लोरोसेइन आदि के साथ लेबल किए जाते हैं, और प्राइमर और फ्लोरोसेंट जांच का उपयोग विशेष रूप से एक ही समय में प्रवर्धन के लिए टेम्पलेट से बांधने के लिए किया जाता है।

एक मात्रात्मक वास्तविक समय परिणाम उत्पादन प्राप्त करने के लिए फ्लोरेसेंस सिग्नल संग्रह प्रणाली के वास्तविक समय संग्रह संकेत के माध्यम से प्रवर्धित परिणाम एकत्र और कंप्यूटर विश्लेषण और प्रसंस्करण प्रणाली को प्रेषित किए जाते हैं।

रियल टाइम आरटी-पीसीआर COVID-19 वायरस का पता लगाने के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया प्रयोगशाला तरीकों में से एक है। हालांकि कई देशों ने इबोला वायरस और जीका वायरस जैसी अन्य बीमारियों के निदान के लिए रियल टाइम आरटी-पीसीआर का इस्तेमाल किया है, लेकिन कई कोविड-19 वायरस के लिए इस विधि को ढालने के साथ-साथ अपनी राष्ट्रीय परीक्षण क्षमताओं को बढ़ाने में समर्थन की जरूरत है ।

कोविड-19 वायरस के साथ रियल टाइम आरटी-पीसीआर कैसे काम करती है?

एक नमूना शरीर के उन हिस्सों से एकत्र किया जाता है जहां COVID-19 वायरस इकट्ठा होता है, जैसे कि एक व्यक्ति की नाक या गले। नमूना कई रासायनिक समाधान है कि प्रोटीन और वसा जैसे पदार्थों को दूर करने और है कि केवल नमूने में मौजूद आरएनए निकालने के साथ इलाज किया जाता है । यह निकाले गए आरएनए व्यक्ति की अपनी आनुवंशिक सामग्री का मिश्रण है और, यदि मौजूद है, वायरस के आरएनए ।

आरएनए एक विशिष्ट एंजाइम का उपयोग कर डीएनए के लिए लिखित रिवर्स लिखित है । इसके बाद वैज्ञानिक डीएनए के अतिरिक्त छोटे टुकड़े जोड़ते हैं जो लिखित वायरल डीएनए के विशिष्ट भागों के पूरक होते हैं । यदि वायरस एक नमूने में मौजूद है, इन टुकड़ों को खुद को वायरल डीएनए के वर्गों को लक्षित करने के लिए देते हैं । जोड़ा आनुवंशिक टुकड़ों में से कुछ प्रवर्धन के दौरान डीएनए किस्में के निर्माण के लिए उपयोग किया जाता है, जबकि दूसरों के डीएनए के निर्माण और किस्में है, जो तो वायरस का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है मार्कर लेबल जोड़ने के लिए उपयोग किया जाता है ।

इसके बाद इस मिश्रण को एक आरटी-पीसीआर मशीन में रखा जाता है। मशीन तापमान के माध्यम से चक्र है कि गर्मी और मिश्रण शांत करने के लिए विशिष्ट रासायनिक प्रतिक्रियाओं कि वायरल डीएनए के लक्ष्य वर्गों की नई, समान प्रतियां बनाने को ट्रिगर । वायरल डीएनए के लक्षित वर्गों की नकल जारी रखने के लिए चक्र को बार-बार दोहराया जाता है । प्रत्येक चक्र पिछले नंबर डबल्स: दो प्रतियां चार हो जाते हैं, चार प्रतियां आठ हो जाते हैं, और इतने पर । एक मानक वास्तविक समय आरटी-पीसीआर सेट-अप आमतौर पर 35 चक्रों से गुजरता है, जिसका अर्थ है कि, प्रक्रिया के अंत तक, वायरल डीएनए के वर्गों की लगभग 35 अरब नई प्रतियां नमूने में मौजूद वायरस के प्रत्येक कतरा से बनाई जाती हैं।

वायरल डीएनए वर्गों की नई प्रतियां के रूप में बनाया जाता है, मार्कर लेबल डीएनए किस्में को देते है और फिर एक फ्लोरोसेंट डाई है, जो मशीन के कंप्यूटर द्वारा मापा जाता है और स्क्रीन पर वास्तविक समय में प्रस्तुत जारी करते हैं । कंप्यूटर प्रत्येक चक्र के बाद नमूने में फ्लोरेसेंस की मात्रा को ट्रैक करता है। जब फ्लोरेसेंस का एक निश्चित स्तर पार हो जाता है, तो यह पुष्टि करता है कि वायरस मौजूद है। वैज्ञानिकों ने यह भी निगरानी की कि संक्रमण की गंभीरता का अनुमान लगाने के लिए इस स्तर तक पहुंचने में कितने चक्र लगते हैं: चक्र जितना कम होता है, वायरल संक्रमण उतना ही गंभीर होता है।

रियल टाइम आरटी-पीसीआर का इस्तेमाल क्यों करें?

वास्तविक समय आरटी-पीसीआर तकनीक अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट है और तीन घंटे के रूप में छोटे रूप में एक विश्वसनीय निदान प्रदान कर सकती है, हालांकि प्रयोगशालाएं औसतन छह से आठ घंटे के बीच लेती हैं। अन्य उपलब्ध वायरस अलगाव विधियों की तुलना में, रियल टाइम आरटी-पीसीआर काफी तेज है और इसमें संदूषण या त्रुटियों की संभावना कम है, क्योंकि पूरी प्रक्रिया एक बंद ट्यूब के भीतर की जा सकती है। यह COVID-19 वायरस का पता लगाने के लिए उपलब्ध सबसे सटीक तरीका बना हुआ है।

हालांकि, रियल टाइम आरटी-पीसीआर का उपयोग पिछले संक्रमणों का पता लगाने के लिए नहीं किया जा सकता है, जो वायरस के विकास और प्रसार को समझने के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि वायरस केवल समय की एक विशिष्ट खिड़की के लिए शरीर में मौजूद होते हैं। पिछले संक्रमणों का पता लगाने, ट्रैक करने और अध्ययन करने के लिए अन्य तरीके आवश्यक हैं, विशेष रूप से वे जो लक्षणों के बिना विकसित और फैल सकते हैं।