कैसे एक जीन बंदूक का उपयोग करने के लिए

1. सामग्री की तैयारी

मध्यम की एक पतली परत को 9 सेमी 2 संस्कृति डिश पर रखा गया था, और सामग्री (आमतौर पर अपरिपक्व भ्रूण, परिपक्व भ्रूण, छोटे कैलस, निलंबन कोशिकाओं, प्रोटोप्लास्ट आदि) को 3 सेमी के व्यास के साथ पकवान के केंद्र में रखा गया था। ।

2, सोने के पाउडर का इलाज

एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में 60mg सोने का पाउडर या टंगस्टन पाउडर लें, 1ml निरपेक्ष इथेनॉल मिलाएं, 3min के लिए अच्छी तरह से हिलाएं, 96rain पर 1rain के लिए अपकेंद्रित्र, सतह पर तैरनेवाला निकालें, बाँझ पानी की 1ml जोड़ें और अच्छी तरह से मिश्रण करें, 9615g पर अपकेंद्रित्र, ऊपर चरण 3 दोहराएँ। टाइम्स। अंत में, सोने के पाउडर को बाँझ आसुत जल के 1 मिलीलीटर में निलंबित कर दिया गया और 4 'C या कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया गया।

3, डीएनए प्रसंस्करण

50tA गोल्ड पाउडर सस्पेंशन लें, 5 वां प्लास्मिड डीएनए (1.0 / lg ~ 1) घोल, 50 // l डालें

0.1 mol / L शुक्राणुनाशक (इस्तेमाल किया गया समाधान बाँझ-निष्फल था), 3 मिनट के लिए हिल गया, 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर छोड़ दिया, 10 एस के लिए 9615 ग्राम पर अपकेंद्रित्र, सतह पर तैरनेवाला त्यागें; 250 ~ 1 निरपेक्ष इथेनॉल जोड़ें, 10 एस के लिए 9615 ग्राम पर अपकेंद्रित्र को हिलाएं और सतह पर तैरनेवाला त्यागें। गोली निरपेक्ष इथेनॉल के 60/1 1 में resuspended और 5 शॉट्स (10 से 1 प्रति शॉट) के लिए इस्तेमाल किया गया था।

4, जीन बंदूक का संचालन

जीन गन के सभी ऑपरेशन को सड़न रोकनेवाला परिस्थितियों में किया जाता है, इस प्रकार है:

1) जीन बंदूक की सतह और 70% इथेनॉल के साथ नमूना कक्ष कीटाणुरहित। इसी समय, बैरियर नेट और क्लीवेबल डिस्क, माइक्रो-इलास्टिक कैरियर, इसके धारक और फिक्सिंग टूल को 70% इथेनॉल के साथ 15 मिनट के लिए भिगोया गया, और फिर सूखने के लिए एक साफ बेंच पर रखा गया। स्प्लिटेबल डायफ्राम, फिक्स्ड कवर, और माइक्रो-इलास्टिक कैरियर लॉन्च करने वाले डिवाइस को 70% इथेनॉल और ब्लो ड्राई के साथ सतह-निष्फल किया जा सकता है।

2) बनाए रखने वाली रिंग में माइक्रोप्रार्टल स्लाइड डालें, और डीएनए और गोल्ड पाउडर के मिश्रण को माइक्रोपार्टिकल स्लाइड के केंद्र में जोड़ें और लगभग 1 मिनट के लिए सूखें।

3) इसके धारक पर टूटी झिल्ली स्थापित करें और इसे गैस त्वरक पर दक्षिणावर्त घुमाएं।

4) स्पेस रिंग, ब्लॉकिंग नेट, ब्लॉकिंग नेट होल्डर, पार्टिकल कैरियर और फिक्सिंग रिंग (नीचे आने वाले कणों के साथ चेहरा) स्थापित करें, कवर को कस लें, और इसे ग्रैब में डालें।

5) बमबारी कक्ष में नमूना रखें और दरवाजा बंद करें।

6) हीलियम सिलेंडर के मुख्य वाल्व को खोलें और हीलियम रेगुलेटर वाल्व को दक्षिणावर्त घुमाएं ताकि दबाव नापने का यंत्र का संकेत डायाफ्राम दबाव 200Psi (= 1.379MPa) से अधिक हो।

7) जीन बंदूक और ट्रांसफार्मर स्विच चालू करें।

8) वैक्यूम बटन दबाएं। जब वैक्यूम 26-28in एचजी (= 88.05 .8 94.82kPa) हो, तो होल्ड बटन को जल्दी से दबाएं, फिर लॉन्च बटन को दबाकर रखें और इसे सक्रिय होने तक रखें।

9) वैक्यूम टेबल को शून्य करने के बाद नमूना को रीसेट करने के लिए वेंट कुंजी दबाएं।

10) चुप रहो।

हीलियम सिलेंडर के मुख्य स्विच को कस लें, एक खाली बंदूक को दबाएं, दबाव गेज के सूचक को शून्य पर लौटें, फिर दबाव गेज समायोजन वाल्व वामावर्त घुमाएं; जीन गन के मुख्य स्विच और ट्रांसफार्मर के स्विच को बंद करें।