सामान्य समस्याएं जब अल्ट्रासोनिक होमोजेनाइज़र Escherichia कोलाई को तोड़ता है

ई। कोलाई विदेशी प्रोटीन को व्यक्त करता है। जब सॉनेट किया जाता है, तो इसे पीबीएस में 1% ट्राइटन-एक्स -100 से निलंबित कर दिया जाता है। अल्ट्रासोनिक प्रभाव बेहतर है। 1% ट्राइटन-एक्स -100 का प्रभाव अभी भी स्पष्ट है। काम करता है, जैसे कि स्ट्रेप्टोमी।

बैक्टीरियल वर्षा सीधे नमूना 1buffer जोड़ते हैं, 5ml मर्कैप्टोएथेनॉल मिलाते हैं, मिश्रण, सेंट्रीफ्यूज, 10min के लिए उबाल लें, सीधे लोड, धुंधला और विघटित चरण निम्नानुसार हैं: 1min के लिए माइक्रोवेव ओवन में उचित मात्रा में डाई रंग में गोंद डालें, रंगाई समाधान को एक बड़ी मात्रा से बदल दिया जाता है पानी को 10 मिनट के लिए माइक्रोवेव में पकाया जा सकता है।

पुनः संयोजक प्रोटीन को व्यक्त करने के बाद, कोशिकाओं को अल्ट्रासोनिक तरंग द्वारा बाधित किया गया था, एक आइस बाथ, 400W और 2S का उपयोग करके 1S के लिए बंद कर दिया गया था, लेकिन थोड़े समय में बड़ी मात्रा में फोम उत्पन्न हुआ, जिसने पेराई क्षमता को प्रभावित किया। दोनों pbs और ट्रिस बफ़र समान थे, और अंत में पेराई अपूर्ण थी। लेकिन मेरा लक्ष्य प्रोटीन इन अखंड कोशिकाओं में है, जो मुझे प्रयोगात्मक परिणाम प्राप्त करने में असमर्थ बनाता है।

मुझे आपको इस स्थिति और समाधान का विश्लेषण क्यों देना चाहिए।

1. बुलबुले उत्पन्न हो जाएंगे क्योंकि आपकी जांच की स्थिति अच्छी तरह से नहीं रखी गई है, जांच को नीचे के करीब होना चाहिए, लगभग 1 सेमी (मैं आमतौर पर नीचे से 0.5 सेमी हूं), उपकरण में अलग-अलग शक्ति का स्तर होगा, लेकिन आप निरीक्षण कर सकते हैं पृष्ठ, उतार-चढ़ाव हैं, लेकिन बहुत आक्रामक मत बनो।

2. सुपर 3 एस प्रभाव को देखने के लिए 10 एस, अल्ट्रासाउंड को लगभग 20 बार रोकता है

3. सींग की स्थिति पर ध्यान दें। यदि आप सही नहीं हैं, तो आपको इसे समय पर समायोजित करना चाहिए। इसके अलावा, बैक्टीरिया की एकाग्रता के दृष्टिकोण से, कुचलने पर मात्रा बढ़ाने की कोशिश करें, ताकत 60% से अधिक नहीं होनी चाहिए।

4. सुपर 8S के लिए 8S की कोशिश करें। कुछ बैक्टीरिया प्रोटीन के लिए, आपकी विधि गर्मी को फैलाना मुश्किल है, जिसके परिणामस्वरूप प्रोटीन विकृतीकरण और बुलबुला पीढ़ी है। थोड़ी देर के लिए रुकना सबसे अच्छा है। यह समावेशन निकायों के रूप में अधिक सामान्य है।