टूटी हुई कोशिकाओं के बारे में अक्सर पूछे जाने वाले प्रश्न

1. ई. कोलाई विदेशी प्रोटीन व्यक्त करता है । जब sonicated, यह 1% ट्राइटन-X-१०० युक्त पंजाबियों में निलंबित कर दिया है । अल्ट्रासाउंड का असर बेहतर होता है । 1% ट्राइटन-X-१०० का प्रभाव अभी भी स्पष्ट है । कुछ अन्य बैक्टीरिया भी काम करते हैं, जैसे Streptomyces. रिकॉमबिनेंट प्रोटीन व्यक्त करने के बाद, कोशिकाओं अल्ट्रासोनिक कोशिका व्यवधान द्वारा बाधित किया गया, एक बर्फ स्नान का उपयोग कर, 400w, और 1s के लिए 2s के लिए कुचल दिया, लेकिन फोम की एक बड़ी मात्रा में एक कम समय में उत्पंन किया गया था, जो कुचल शक्ति प्रभावित । पंजाब और tris दोनों ही इस तरह के थें । विखंडन अधूरा है, और लक्ष्य प्रोटीन इन अटूट कोशिकाओं में है, मुझे क्या करना चाहिए?

विश्लेषण: बुलबुला उत्पंन हो जाएगा क्योंकि जांच की स्थिति अच्छी तरह से नहीं रखा है; जांच के नीचे के करीब 0.5-1cm, के बारे में होना चाहिए; यंत्र के अनुसार शक्ति भिन्ना होगी, किंतु तरल स्तर देखा जा सकता है, वहाँ उतार-चढ़ाव है लेकिन मजबूत भी नहीं है; तुम अल्ट्रासोनिक कोशिकाओं का चयन कर सकते है कोल्हू 10s के लिए 3s के लिए टूट गया है और 20-30 बार के लिए टूट गया । हॉर्न की पोजीशन पर भी ध्यान दिया जाना चाहिए । यदि ध्वनि गलत है, यह समय में समायोजित किया जाना चाहिए; बैक्टीरिया की एकाग्रता को ध्यान में रखते. क्रश करते समय वॉल्यूम बढ़ाने की कोशिश करें, Zui की ताकत ६०% से अधिक नहीं होनी चाहिए; 8s के लिए 8s तोड़ने की कोशिश करें, कुछ बैक्टीरियल प्रोटीन के लिए, प्रोटीन विकार के कारण बुलबुले पैदा करने में मुश्किल होती है, जिसे थोड़ी देर के लिए रोका जा सकता है । एक प्रोटीन शामिल शरीर के रूप में पाया ।

2. sonication Streptomyces (actinomycetes) के लिए क्या शर्तें हैं?

विश्लेषणात्मक: actinomycetes (जी + सी) दाढ़ प्रतिशत (ग्राम पॉजिटिव (Eubacteria) prokaryotic प्रणाली है, जो आणविक और जैविक prokaryotes करने के लिए अद्वितीय विशेषताओं है के वंशावली पेड़ पर शाखाकरण समूह के हैं । हालांकि, इसके विभिंन समूहों में, कोशिका दीवार की रासायनिक संरचना बहुत बदलता है । ई. कोलाई अल्ट्रासाउंड में, 400W प्रयोग किया जाता है, और 5 एस के लिए 5 एस तोड़ने की विधि प्रभावी है, लेकिन यह Streptomyces पर प्रयोग किया जाता है, और यह सेल दीवार संरचना में अंतर के कारण कोई प्रभाव नहीं है । Streptomyces (actinomycetes) के पूर्व कताई उपचार आम तौर पर बैक्टीरियल निलंबन के एक निश्चित एकाग्रता के लिए कॉन्फ़िगर किया गया है । अल्ट्रासोनिक कोशिका अवरोधक का उपयोग कर कुचल के लिए विशिष्ट स्थितियों रहे हैं: कोशिकाओं को इकट्ठा करने के लिए 5 मिनट के लिए ५ ००० आर/मिनट में 24 एच संस्कृति समाधान में बैक्टीरिया का संग्रह; एक पीएच ७.५ Na2HPO-NaH2PO बफर के साथ धुलाई 3 बार, और फिर कोशिकाओं को एक 1:3 जीवाणु निलंबन बफर का उपयोग में तैयार किया गया । एक ४० मिलीलीटर बड़े प्लास्टिक परीक्षण ट्यूब में रखा; एक बर्फ स्नान में बड़े प्लास्टिक परीक्षण ट्यूब प्लेस और एक अल्ट्रासोनिक सेल व्यवधान (पावर 200W, 1/2 "जांच, 30 के लिए क्रश, आंतरायिक 30) के साथ यह क्रश; १२ ००० आर/मिनट में कुचल समाधान 30 मिनट के लिए उच्च गति से केंद्रापसारक, सेल मलबे और supernatant इकट्ठा । पीएच 8 में प्री-कूल्ड खारा या Tris-एचसीएल के साथ धोने की कोशिकाओं को भी एक बार धोया जा सकता है । इसके अलावा, अल्ट्रासोनिक खुराक बहुत नमूना और बैक्टीरिया की मात्रा के साथ बदलता है । पावर 5 एस के लिए कुचला 400-600w हो सकता है, 5 एस, बर्फ स्नान के लिए बंद कर दिया, और 1 मिमी PMSF के अंतिम एकाग्रता जोड़ा जाता है । आदेश में उपयुक्त अल्ट्रासोनिक तीव्रता और आवृत्ति का निर्धारण करने के लिए, यह जांच करने के लिए आवश्यक है कि क्या बैक्टीरिया पूरी तरह से किसी भी समय टूट रहे हैं ।